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培养说明

细胞系收货须知 收到的货物会包含以下几种类型，您的货物属于： □细胞冻存管：收到货物后，请检查箱子里面是否还有干冰。 ● 若干冰已剩余不多，不能掩埋冻存管，请及时拍照，并第一时间联系销售。 ● 若干冰充裕，可以安排复苏细胞；不安排复苏，请将细胞冻存管转移到液氮进行保存。短期（一周内）的存放可以放在-80冰箱，建议最好保存在液氮中。 □培养瓶的活细胞：收到请检查培养瓶是否完好，是否有漏液，培养基是否浑浊 ●若出现以上问题请于当天和我们销售取得联系，我们会第一时间为您处理。 ● 若以上问题都没有出现:拆掉培养瓶的外包装，在显微镜下对细胞进行多个视野，不同倍镜拍照。然后用酒精对瓶身进行彻底消毒，放在37度二氧化碳培养箱中进行复温。1-2小时后，拿出在显微镜下观察，并进行多个视野不同倍镜拍照。若细胞达到了可以传代的密度，请及时进行传代。若细胞密度不能进行传代，请回收培养瓶中的培养基，留适量培养基在瓶中，并将培养瓶放在培养箱继续培养即可。 □消化后的细胞悬液：收到请检查管子是否有漏液 ●若漏液，请当天和我们销售取得联系，我们会第一时间为您处理。 ●若完好，将管子用酒精彻底消毒，收集细胞悬液到离心管，1000转，离心5分钟，弃上清，加入培养基重悬，按照 比例分装到 个T25培养瓶，并补充培养基到 ml即可。

细胞操作详细步骤----贴壁细胞 1.细胞复苏 1.1离心法 1.1.1准备一个T25的细胞培养瓶并做好标记，预热好的细胞完全培养基，一支15ml离心管，离心管中加入4-5ml细胞完全培养基。 1.1.2取出细胞冻存管，在37度水浴中快速解冻，将管子擦干并消毒后迅速拿回生物安全柜。 1.1.3将细胞悬液转移到加有培养基的离心管中，1000转离心5分钟。 1.1.4倒掉上清，加入培养基轻轻重悬细胞亦可先将细胞团弹散后加入培养基混匀。 1.1.5将重悬好的细胞转移到T25细胞培养瓶，补充培养基到8ml左右，十字摇晃，将细胞铺匀后放入培养箱培养。 1.2不离心法 1.2.1准备一个T25的细胞培养瓶并做好标记，预热好的细胞完全培养基，培养瓶中加入8ml左右培养基。 1.2.2取出细胞冻存管，在37度水浴中快速解冻，将管子擦干并消毒后迅速拿回生物安全柜。 1.2.3将细胞悬液转移到加有培养基的培养瓶中，十字摇晃，将细胞铺匀后放入培养箱培养，接种16小时后更换培养基。 2.细胞传代 2.1准备细胞完全培养基，细胞培养瓶，胰酶（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA），DPBS。 2.2弃上清，并加2-3mlDPBS轻柔冲洗培养瓶内细胞1-2次。 2.3加入1ml胰酶，室温或者37度消化，直到细胞成片脱落，加入3-4ml完全培养基终止消化，如果有成团块脱落的细胞可轻轻吹打分散细胞后再终止消化。 2.4收集细胞悬液，1000转离心5分钟，弃上清，加入培养基轻轻重悬细胞亦可先将细胞团弹散后加入培养基混匀。 2.5将重悬好的细胞按比例分装至T25细胞培养瓶，补充培养基到8ml左右，十字摇晃，将细胞铺匀后放入培养箱培养。 3.细胞冻存 3.1准备细胞冻存液，细胞冻存管，胰酶（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA），DPBS。 3.2弃上清，并加2-3mlDPBS轻柔冲洗培养瓶内细胞1-2次。 3.3加入1ml胰酶，室温或者37度消化，直到细胞成片脱落，加入完全培养基终止消化，如果有成团块脱落的细胞可轻轻吹打分散细胞后再终止消化。 3.4收集细胞悬液，1000转离心5分钟，弃上清。 3.5加入冻存液，重悬细胞，并分装到冻存管，冻存密度0.8-1.5×106细胞/ml。 3.6将冻存管放入程序降温盒，并放到-80℃冰箱，过夜后将冻存管转移到液氮保存。 4.注意事项 4.1建议收到细胞后先用我们配套的培养基和血清。收到活细胞的客户培养瓶中的培养基可回收使用，保存在4度可使用一周。 4.2不同实验室操作上会有些许差异，为了避免细胞不适应，请先按照说明书推荐的方法和操作步骤培养，待细胞冻存后可根据自己的习惯操作看细胞是否能够适应。 4.3建议收到细胞后，前几代及时冻存一些细胞，并最好是可以多冻存几个批次。